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    荧光定量PCR技术简介

    分类:
    知识分享
    2020/08/21 09:10
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    【摘要】:

    定义:荧光定量PCR( Realtime Fluorescence Quantitative PCR,RTFQPCR) 是1996 年由美国AppliedBiosystems公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

    原理:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5'端-3'端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。或者使用荧光染料SYBR。SYBR可以结合到双链DNA上面,当体系中的模板被扩增时,SYBR可以有效结合到新合成的双链上面,随着PCR的进行,结合的SYBR染料越来越多,被仪器检测到的荧光信号越来越强,从而达到定量的目的。

    应用:该方法全程在单管封闭环境下进行,微机控制,避免了假阳性或者假阴性的出现,具有极高的灵敏性,非常适合微量病原的快速检测。荧光定量PCR技术具有精确度高、特异性强、重复性好、自动化程度高的优点,目前已广泛应用于各种动物病原的快速检测。如非洲猪瘟病毒(ASFV);猪圆环病毒2型、3型(PCV2、PCV3);猪瘟病毒(HCV);塞尼卡病毒A型(SVA);牛诺如病毒(BNoV);牛病毒性腹泻病毒(BVDV);新城疫病毒(NDV);口蹄疫病毒(FMDV);蓝舌病病毒8型(BTV-8);犬腺病毒(CAV);犬细小病毒(CPV);禽流感病毒(AIV);沙门菌;大肠埃希菌等。

    吉林vwin德嬴生物技术有限责任公司为了满足新产品研制及市场疫病检测的需要,以CNAS检验中心为主体,逐步建立了多种病原的荧光定量PCR检测方法,扩展了检测范围,提高了检测的灵敏度与准确性。相信新技术及新产品的不断升级创新,可以为广大养殖户提供更多的帮助与支持。